Partículas Lentivirales de Activación (h) AMPKγ2: sc-404970-LAC

PRKAG2 codifica la subunidad reguladora γ2 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor energético heterotrimérico central que vincula las proporciones celulares de AMP/ADP:ATP con la reprogramación metabólica. AMPKγ2 regula la unión de nucleótidos y el control alostérico del complejo catalítico, influyendo en vías posteriores que coordinan la captación de glucosa, la oxidación de ácidos grasos, la homeostasis mitocondrial y la supresión de programas anabólicos a través de nodos como mTORC1 y la autofagia. En tejidos humanos, PRKAG2 es muy relevante para la fisiología de alta demanda energética y se ha asociado con almacenamiento de glucógeno cardíaco y anomalías de conducción, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del acoplamiento metabólico y electrofisiológico. La alteración de la actividad de AMPKγ2 también aporta información a modelos de adaptación al estrés, señalización de nutrientes y control de calidad de orgánulos en diversos tipos celulares.

Las partículas de activación lentiviral AMPKγ2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRKAG2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral AMPKγ2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRKAG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de AMPKγ2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRKAG2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.