Particules Lentivirales d'Activation (h) AMPKγ2: sc-404970-LAC

PRKAG2 code la sous-unité régulatrice γ2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur énergétique central hétérotrimérique qui relie les rapports cellulaires AMP/ADP:ATP à une reprogrammation métabolique. AMPKγ2 régule la liaison aux nucléotides et le contrôle allostérique du complexe catalytique, influençant des voies en aval qui coordonnent l’absorption du glucose, l’oxydation des acides gras, l’homéostasie mitochondriale et la suppression des programmes anaboliques via des nœuds tels que mTORC1 et l’autophagie. Dans les tissus humains, PRKAG2 est particulièrement pertinent pour les physiologies à forte demande énergétique et a été associé au stockage cardiaque de glycogène ainsi qu’à des anomalies de conduction, ce qui appuie son utilisation dans des études mécanistiques du couplage métabolique et électrophysiologique. La perturbation de l’activité d’AMPKγ2 éclaire également des modèles d’adaptation au stress, de signalisation nutritionnelle et de contrôle de la qualité des organites dans divers types cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales AMPKγ2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRKAG2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AMPKγ2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRKAG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AMPKγ2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRKAG2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.