Plasmide Double Nickase (h) AMPKβ2: sc-403537-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AMPKβ2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AMPKβ2 Double Nickase (h) et le plasmide AMPKβ2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKAB2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AMPKβ2 Antibody (C-7): sc-376752
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AMPKβ2 | sc-403537-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AMPKβ2 | sc-403537-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAB2 code la sous-unité régulatrice β2 de l’AMP‑activated protein kinase (AMPK), un capteur énergétique central qui coordonne les réponses cellulaires à la disponibilité des nutriments et au stress énergétique. AMPKβ2 contribue à l’assemblage des sous-unités catalytique α et régulatrice γ et participe à la stabilité du complexe, à sa localisation subcellulaire et à la sélection des substrats, influençant ainsi des voies qui régissent la captation du glucose, l’oxydation des acides gras, l’autophagie et l’inhibition des signalisations anaboliques via mTORC1. Par ces fonctions, AMPKβ2 contribue au maintien de l’homéostasie métabolique dans différents tissus et module des programmes adaptatifs lors de l’hypoxie, du stress mitochondrial et de signaux de type « exercice ». La dérégulation de la signalisation AMPK, y compris des modifications de l’activité associée à PRKAB2, a été reliée à des phénotypes de maladies métaboliques et est fréquemment étudiée dans le contexte du métabolisme des cellules cancéreuses et de leur tolérance au stress.
AMPKβ2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKAB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKAB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKAB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKAB2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.