AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403537

Übersicht

PRKAB2 kodiert die β2‑regulatorische Untereinheit der AMP‑aktivierten Proteinkinase (AMPK), einer heterotrimeren Serin/Threonin‑Kinase, die den zellulären Energiestatus über das Verhältnis von AMP/ADP zu ATP erfasst. AMPKβ2 trägt zur Assemblierung und subzellulären Lokalisation des Komplexes bei und koppelt die Aktivierung durch upstream‑Signale an Phosphorylierungskaskaden, die anabole Programme dämpfen und gleichzeitig katabole Prozesse fördern, darunter Glukoseaufnahme, Fettsäureoxidation und Autophagie, u. a. über Cross‑Talk mit mTOR und verwandten nährstoffsensitiven Netzwerken. Durch diese Funktionen ist AMPKβ2 relevant für Untersuchungen zur Anpassung an metabolischen Stress, zur mitochondrialen Homöostase und zur Kontrolle des Zellwachstums. Veränderte AMPK‑Signalgebung wird mit Stoffwechselerkrankungen und der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, wodurch PRKAB2 ein nützlicher Knotenpunkt ist, um energieabhängige Regulation von Proliferations‑ und Überlebenssignalwegen zu untersuchen.

Das AMPKβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRKAB2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRKAB2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRKAB2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AMPKβ2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRKAB2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AMPKβ2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRKAB2-Exone abzielen, die für die AMPKβ2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRKAB2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AMPKβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AMPKβ2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRKAB2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AMPKβ2 HDR-Plasmid (h) und AMPKβ2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRKAB2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRKAB2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.