Plasmide CRISPR d'Activation (h) AMPKβ2: sc-403537-ACT

PRKAB2 code la sous-unité régulatrice humaine AMPKβ2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur énergétique central qui intègre la disponibilité des nutriments au métabolisme cellulaire. AMPKβ2 favorise l’assemblage et la stabilité du complexe AMPK hétérotrimérique et contribue à la liaison au glycogène, permettant un contrôle coordonné de la captation du glucose, de la glycolyse, de l’oxydation des acides gras et de la biogenèse mitochondriale. Par une signalisation dépendante de la phosphorylation, l’AMPK interagit avec les voies mTOR, de l’autophagie et de l’insuline/IGF afin de réguler la croissance, l’adaptation au stress et l’homéostasie bioénergétique. Une signalisation AMPK dérégulée et une expression altérée de PRKAB2 ont été associées à des déséquilibres métaboliques et à des programmes de stress cellulaire pertinents pour la recherche sur l’obésité, le diabète de type 2 et le métabolisme tumoral.

AMPKβ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRKAB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AMPKβ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRKAB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRKAB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AMPKβ2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRKAB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AMPKβ2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AMPKβ2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRKAB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.