Plasmide Double Nickase (h) AMPKβ1: sc-402952-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AMPKβ1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AMPKβ1 Double Nickase (h) et le plasmide AMPKβ1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKAB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AMPKβ1 Antibody (Z14): sc-100357
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AMPKβ1 | sc-402952-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AMPKβ1 | sc-402952-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAB1 code la sous-unité régulatrice β1 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur central de l’état énergétique cellulaire qui intègre la disponibilité des nutriments aux besoins métaboliques. AMPKβ1 soutient l’assemblage et la stabilité du complexe AMPK hétérotrimérique et contribue au ciblage des substrats ainsi qu’à l’association au glycogène, façonnant des programmes de phosphorylation qui freinent les voies anaboliques et favorisent les processus cataboliques générateurs d’ATP. Via la signalisation AMPK, PRKAB1 influence la régulation de mTORC1, l’autophagie, l’oxydation des acides gras et l’homéostasie du glucose en réponse au stress énergétique. Une activité altérée de la voie AMPK a été associée à des dysfonctionnements métaboliques et à la reprogrammation, liée au cancer, des réseaux de croissance et d’adaptation au stress, faisant de PRKAB1 un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation dépendante de l’énergie.
AMPKβ1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKAB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKAB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKAB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKAB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.