Plasmide Double Nickase (h) AMPK alpha 2: sc-400277-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AMPK alpha 2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AMPK alpha 2 Double Nickase (h) et le plasmide AMPK alpha 2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKAA2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AMPK alpha 2 | sc-400277-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AMPK alpha 2 | sc-400277-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAA2 code la sous-unité catalytique α2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur central de l’état énergétique cellulaire activé par l’AMP/l’ADP et par des kinases en amont telles que LKB1. AMPKα2 coordonne l’adaptation métabolique en régulant des voies qui contrôlent la captation du glucose, l’oxydation des acides gras, l’autophagie et la biogenèse mitochondriale, tout en freinant la signalisation anabolique via des cibles incluant mTORC1. Dans les cellules humaines, la signalisation dépendante de PRKAA2 contribue aux réponses au stress lors de la restriction en nutriments et de l’hypoxie, et façonne des programmes transcriptionnels qui influencent la prolifération et la survie. Le dérèglement de l’activité d’AMPKα2 a été associé à des troubles métaboliques et au remodelage métabolique lié au cancer, faisant de PRKAA2 une cible fréquemment étudiée dans les réseaux d’homéostasie énergétique et de signalisation du stress.
AMPK alpha 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKAA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKAA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKAA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKAA2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.