Plasmide CRISPR d'Activation (m2) AMPK alpha 1: sc-430618-ACT-2

Chez la souris, Prkaa1 code la sous-unité catalytique α1 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPKα1), un capteur central de l’état énergétique qui s’active lorsque les niveaux d’AMP/ADP augmentent afin de rétablir l’homéostasie de l’ATP. AMPKα1 intègre des signaux en amont provenant de LKB1 et de CaMKK2 et régule des voies métaboliques telles que l’oxydation des acides gras, la captation du glucose et l’inhibition des programmes anaboliques via des cibles comme ACC et mTORC1, tout en influençant également l’autophagie et la biogenèse mitochondriale. La dérégulation de la signalisation d’AMPKα1 est associée à une altération de la détection des nutriments et des réponses au stress cellulaire, avec des implications pour l’obésité, le diabète de type 2, la stéatose hépatique, l’inflammation et le métabolisme tumoral. L’édition du gène Prkaa1 dans des modèles murins permet des études mécanistiques de l’équilibre énergétique, de l’activation et de la polarisation des cellules immunitaires, ainsi que du remodelage métabolique spécifique des tissus, soutenant des workflows de génomique fonctionnelle en recherche sur le métabolisme et la biologie du cancer.

AMPK alpha 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Prkaa1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AMPK alpha 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Prkaa1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Prkaa1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AMPK alpha 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Prkaa1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AMPK alpha 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AMPK alpha 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Prkaa1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.