Plásmido CRISPR de Activación (h) AMPK alpha 1: sc-400104-ACT

PRKAA1 codifica la AMPK alfa 1, la subunidad catalítica del complejo de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), que detecta el estado energético celular y coordina respuestas metabólicas adaptativas. Tras su activación, AMPK modula la captación de glucosa, la oxidación de ácidos grasos, la biogénesis mitocondrial y la autofagia, a la vez que restringe las vías anabólicas, en parte mediante la comunicación cruzada con mTORC1 y la regulación de programas transcripcionales. AMPK alfa 1 integra señales de quinasas reguladoras aguas arriba como LKB1 y CaMKK2 para controlar el crecimiento celular, el equilibrio redox y la supervivencia frente al estrés. La señalización de AMPK desregulada se ha implicado en trastornos metabólicos, en la reprogramación metabólica de células cancerosas y en fenotipos inflamatorios, lo que convierte a PRKAA1 en un nodo útil para el análisis a nivel de vías.

AMPK alpha 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKAA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AMPK alpha 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKAA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKAA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AMPK alpha 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKAA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AMPK alpha 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AMPK alpha 1 en células tumorales con expresión de PRKAA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.