Plasmide CRISPR d'Activation (h) AMIGO2: sc-403312-ACT

AMIGO2 (molécule d’adhésion comportant un domaine de type Ig 2) est une protéine transmembranaire de type I située à la surface cellulaire, appartenant à la famille AMIGO, qui favorise les interactions cellule–cellule, la croissance des neurites et le guidage axonal au cours du développement du système nerveux. Dans les cellules humaines, AMIGO2 a été associée à la régulation de programmes de signalisation dépendants de l’adhérence, ainsi qu’à la migration et à la survie, en lien avec le remodelage du cytosquelette et des voies médiées par des récepteurs. Une expression altérée d’AMIGO2 a été rapportée dans des contextes de progression tumorale et de phénotypes associés aux métastases, où des modifications de l’adhérence et de la motilité peuvent remodeler l’architecture tissulaire. Ces caractéristiques font d’AMIGO2 une cible utile pour étudier comment des signaux extracellulaires sont couplés à la signalisation intracellulaire et aux états de différenciation.

AMIGO2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AMIGO2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AMIGO2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AMIGO2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AMIGO2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AMIGO2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AMIGO2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AMIGO2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AMIGO2 dans les cellules tumorales présentant une expression de AMIGO2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.