Plásmido Doble Nickase (h) AMBP: sc-403136-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AMBP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AMBP (h) y el plásmido de doble nickasa AMBP (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AMBP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AMBP Anticuerpo (532): sc-81948
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AMBP | sc-403136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AMBP | sc-403136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBP codifica el precursor de alfa-1-microglobulina/bikunin, una glucoproteína secretada que se procesa proteolíticamente en alfa-1-microglobulina y bikunin, las cuales circulan en el plasma y están presentes en los fluidos extracelulares. La alfa-1-microglobulina actúa como un depurador que se une al hemo y a radicales, implicado en la homeostasis redox y en la protección frente al estrés oxidativo, mientras que el bikunin es un inhibidor de serinproteasas tipo Kunitz que contribuye a la regulación de proteasas extracelulares y a la modulación de la inflamación. A través de complejos de inter-alfa-inhibidor que contienen bikunin, AMBP se vincula con la estabilización de la matriz extracelular, redes de proteasas relacionadas con la coagulación y respuestas a la lesión tisular. Se ha asociado la expresión y el procesamiento alterados de AMBP con estados inflamatorios, marcadores de disfunción renal y hepática, y procesos de remodelación relevantes en diversos contextos de modelos de enfermedad.
AMBP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AMBP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AMBP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AMBP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AMBP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.