Plasmide CRISPR/Cas9 KO alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 (h): sc-416366

Présentation

ATP1A3 code la sous-unité catalytique alpha 3 de la Na⁺/K⁺‑ATPase (ATPase de transport du sodium et du potassium), une ATPase de type P de la membrane plasmique qui utilise l’hydrolyse de l’ATP pour maintenir les gradients transmembranaires de Na⁺ et de K⁺. En modulant le potentiel de membrane au repos, la récupération après le potentiel d’action et les transports secondaires, ATP1A3 influence l’excitabilité neuronale, l’homéostasie ionique et le couplage énergétique dans les tissus excitables. Son activité s’intègre à des processus tels que la transmission synaptique, la régulation du calcium et les réponses au stress cellulaire, qui dépendent de gradients électrochimiques. Des perturbations génétiques et fonctionnelles d’ATP1A3 sont associées à des phénotypes de maladies neurologiques, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier les mécanismes de la neurophysiologie et les dysfonctions du transport ionique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP1A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP1A3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP1A3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP1A3 pour l'étude de la signalisation de alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP1A3 essentiels à la fonction de alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP1A3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP1A3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 plasmide HDR (h) et le alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP1A3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP1A3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.