alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401939

Übersicht

ATP1A2 kodiert die katalytische α2-Untereinheit der Na⁺/K⁺-ATPase, einer P-Typ-ATPase der Plasmamembran, die durch Kopplung der ATP-Hydrolyse an den Ionentransport die intrazellulären Na⁺- und K⁺-Gradienten aufrechterhält. Dieser elektrochemische Gradient stützt das Membranpotenzial, das osmotische Gleichgewicht, den sekundär aktiven Transport sowie die Ca²⁺-Homöostase über den Na⁺/Ca²⁺-Austausch und beeinflusst dadurch die Erregbarkeit und Signalübertragung in elektrisch aktiven Geweben. Die Aktivität von ATP1A2 überschneidet sich mit Signalwegen, die neuronale und gliale Ionenpufferung, synaptische Transmission und zelluläre Stressreaktionen auf Ionenungleichgewichte steuern. Genetische und funktionelle Störungen von ATP1A2 sind mit neurologischen Phänotypen verbunden, darunter die familiäre hemiplegische Migräne sowie verwandte Manifestationen mit Anfällen/Ataxie, wodurch es ein relevantes Ziel für mechanistische Untersuchungen von Erregbarkeitsstörungen ist.

Das alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATP1A2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATP1A2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATP1A2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATP1A2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATP1A2-Exone abzielen, die für die alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATP1A2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATP1A2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 HDR-Plasmid (h) und alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATP1A2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATP1A2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.