Plasmide CRISPR d'Activation (h) alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2: sc-401939-ACT

ATP1A2 code la sous-unité catalytique alpha 2 de la Na⁺/K⁺-ATPase, une ATPase de type P située dans la membrane plasmique qui hydrolyse l’ATP pour échanger le Na⁺ intracellulaire contre le K⁺ extracellulaire, maintenant des gradients électrochimiques essentiels au potentiel de membrane et à l’homéostasie ionique. Cette activité soutient l’excitabilité neuronale, la mise en tampon du K⁺ par les astrocytes, ainsi que le couplage du transport ionique à des processus de transport secondaire qui influencent la gestion du Ca²⁺, la régulation du volume cellulaire et les besoins métaboliques. La fonction d’ATP1A2 interfère avec des voies contrôlant la transmission synaptique et la signalisation excitatrice via son impact sur les gradients ioniques, qui façonnent la récupération du potentiel d’action et la recapture des neurotransmetteurs. Une perturbation génétique ou une régulation altérée d’ATP1A2 a été associée à des phénotypes neurologiques, notamment la migraine hémiplégique familiale de type 2 et une susceptibilité accrue aux crises, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’excitabilité et des interactions glie–neurone.

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATP1A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATP1A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATP1A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATP1A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie alpha 2 Sodium Potassium ATPase/ATP1A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATP1A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.