Particules Lentivirales d'Activation (m) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-419236-LAC

Atp1a1 chez la souris code la sous-unité catalytique alpha 1 de la Na⁺/K⁺‑ATPase, une ATPase de type P qui utilise l’hydrolyse de l’ATP pour maintenir des gradients transmembranaires de Na⁺ et de K⁺, indispensables au potentiel de membrane au repos, à l’équilibre osmotique et au transport actif secondaire. Au-delà de l’homéostasie ionique, ATP1A1 participe à des processus de signalisation associés aux microdomaines membranaires, notamment via des interactions avec les kinases de la famille Src et des voies en aval liées à MAPK/ERK, susceptibles d’influencer la prolifération et les réponses au stress. La perturbation de la fonction de la Na⁺/K⁺‑ATPase est largement utilisée pour étudier l’excitabilité, le transport épithélial et le couplage métabolique, et elle offre des points d’entrée mécanistiques vers des phénotypes pertinents pour les maladies, tels que les dysfonctions cardiométaboliques, les troubles neurologiques de l’excitabilité et les défauts de transport tubulaire rénal. Dans les systèmes murins, Atp1a1 est également utilisé comme marqueur robuste de l’intégrité de la membrane plasmique et comme déterminant de la sensibilité aux glycosides cardiotoniques dans les études de voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Atp1a1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Atp1a1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Atp1a1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.