Plasmide CRISPR d'Activation (m) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-419236-ACT

Atp1a1 code la sous-unité catalytique alpha 1 de la Na⁺/K⁺-ATPase, une ATPase de type P de la membrane plasmique qui maintient les gradients de sodium et de potassium, essentiels au potentiel de membrane, à l’homéostasie osmotique et au transport actif secondaire. En régulant l’équilibre ionique, ATP1A1 influence des processus tels que l’excitabilité neuronale, le transport épithélial, le contrôle du volume cellulaire et le couplage métabolique à l’utilisation de l’ATP. L’activité de la Na⁺/K⁺-ATPase participe également à la transduction du signal en organisant des microdomaines membranaires et en modulant des voies liées à la gestion du calcium et aux réponses au stress. Une dysrégulation de la fonction d’ATP1A1 a été associée à des phénotypes d’excitabilité et de transport altérés, ce qui la rend pertinente pour des études de la fonction neurologique, des épithéliums rénal et des voies aériennes, ainsi que des réponses cellulaires au stress ionique dans des modèles murins.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Atp1a1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Atp1a1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Atp1a1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Atp1a1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Atp1a1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.