Plasmide Double Nickase (h) ALOXE3: sc-408487-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ALOXE3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALOXE3 Double Nickase (h) et le plasmide ALOXE3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALOXE3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) ALOXE3 | sc-408487-NIC | 20 µg | $410.00 |
ALOXE3 code l’arachidonate lipoxygénase 3, une enzyme enrichie dans l’épiderme qui participe au métabolisme oxydatif des acides gras polyinsaturés et contribue à la production de médiateurs lipidiques impliqués dans la différenciation des kératinocytes. Dans le programme de formation de la barrière cutanée, ALOXE3 agit aux côtés d’autres lipoxygénases pour soutenir les processus de cornification et la formation de la couche cornée, en influençant l’organisation des lipides épidermiques et le contrôle de la perméabilité. Une altération de l’activité d’ALOXE3 est associée à des phénotypes d’ichtyose congénitale, reflétant une formation de barrière déficiente et un traitement lipidique modifié. Par conséquent, ALOXE3 est fréquemment étudiée dans des voies reliant l’oxydation des acides gras, la différenciation épidermique et la signalisation inflammatoire dans des modèles de maladies dermatologiques.
ALOXE3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALOXE3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALOXE3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALOXE3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALOXE3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.