Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALKBH4 (h): sc-406350

Présentation

ALKBH4 code un membre de la famille AlkB des dioxygénases dépendantes du Fe(II)/2‑oxoglutarate, impliquées dans des réactions de déméthylation oxydative des acides nucléiques et des protéines. Chez l’humain, ALKBH4 a été associée à la régulation de la dynamique du cytosquelette d’actine et de l’architecture cellulaire, ce qui concorde avec un rôle dans des processus tels que la migration, l’adhésion et la division cellulaires. En lien avec ces activités, ALKBH4 est souvent étudiée dans le contexte de la stabilité du génome, des réponses au stress et du contrôle transcriptionnel ou post‑transcriptionnel. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ALKBH4 ont été explorées dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment des phénotypes associés au cancer où le remodelage du cytosquelette et le métabolisme de l’ADN/ARN sont fréquemment dérégulés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALKBH4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALKBH4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALKBH4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALKBH4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALKBH4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALKBH4 pour l'étude de la signalisation de ALKBH4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALKBH4 essentiels à la fonction de ALKBH4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALKBH4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALKBH4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ALKBH4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALKBH4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALKBH4 plasmide HDR (h) et le ALKBH4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALKBH4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALKBH4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.