Plasmide CRISPR/Cas9 KO Alix (m): sc-422154

Présentation

Pdcd6ip code ALIX, un adaptateur multifonctionnel qui couple le remodelage des membranes au trafic endosomal via des interactions avec des composants d’ESCRT, notamment les protéines CHMP4, ainsi qu’avec des partenaires tels que TSG101. Dans les cellules de souris, ALIX contribue à la biogenèse des corps multivésiculaires, à la libération d’exosomes, à l’abscission lors de la cytokinèse et à la réparation de la membrane plasmique ; il peut aussi influencer des voies de signalisation liées à l’apoptose grâce à ses réseaux d’interactions. L’activité ESCRT dépendante d’ALIX est également détournée lors du bourgeonnement des virus enveloppés et régule le renouvellement des récepteurs membranaires, reliant Pdcd6ip à des voies contrôlant la signalisation cellulaire et la protéostase. La dérégulation du trafic médié par ESCRT/ALIX a été associée, dans des systèmes expérimentaux, à la neurodégénérescence, à la biologie tumorale, ainsi qu’à la pathogenèse immunitaire et virale, faisant de Pdcd6ip un nœud utile pour des études mécanistiques de la dynamique membranaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Alix (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pdcd6ip dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pdcd6ip, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pdcd6ip à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Alix.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pdcd6ip pour l'étude de la signalisation de Alix, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pdcd6ip essentiels à la fonction de Alix
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pdcd6ip pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Alix plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Alix plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pdcd6ip. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Alix plasmide HDR (m) et le Alix (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pdcd6ip pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pdcd6ip définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.