Plasmide Double Nickase (h) Aldose Reductase: sc-401437-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Aldose Reductase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Aldose Reductase Double Nickase (h) et le plasmide Aldose Reductase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AKR1B1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Aldose Reductase Antibody (H-6): sc-166918
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Aldose Reductase | sc-401437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Aldose Reductase | sc-401437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1B1 code l’aldose réductase humaine, une aldo-céto réductase dépendante du NADPH qui catalyse la réduction du glucose en sorbitol, première étape de la voie des polyols. En consommant du NADPH et en favorisant l’accumulation de sorbitol, l’aldose réductase peut influencer l’équilibre rédox cellulaire, les réponses au stress osmotique et le métabolisme en aval du fructose, à l’interface avec les processus de stress oxydant et de détoxification des composés carbonylés. L’activité d’AKR1B1 est fréquemment étudiée dans le contexte du stress métabolique associé à l’hyperglycémie, de la signalisation liée à l’inflammation et de la sensibilité des tissus aux dommages oxydatifs. Dans des modèles expérimentaux, une dérégulation du flux de la voie des polyols et une modification de la gestion des aldéhydes ont été associées à des mécanismes sous-tendant les complications du diabète et, plus largement, des phénotypes de maladies métaboliques.
Aldose Reductase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKR1B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKR1B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKR1B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKR1B1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.