Aldolase C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419083

Panoramica

Aldoc codifica per l’aldolasi C, un enzima glicolitico che catalizza la scissione reversibile del fruttosio-1,6-bisfosfato in triosi fosfato, collegando l’utilizzo del glucosio alla successiva produzione di ATP e ai flussi biosintetici. Nei tessuti murini, ALDOC è arricchita nel sistema nervoso centrale e contribuisce alla compartimentazione metabolica in neuroni e cellule gliali, supportando processi quali la neurotrasmissione e l’equilibrio redox. Oltre alla glicolisi, i membri della famiglia delle aldolasi possono influenzare l’organizzazione del citoscheletro e la trasduzione del segnale tramite interazioni proteina–proteina che collegano il metabolismo all’architettura cellulare. L’alterazione dell’espressione di ALDOC è stata utilizzata come marcatore dello stato metabolico e dell’identità cellulare in neurobiologia, e la disregolazione dei programmi glicolitici è ampiamente rilevante per la neurodegenerazione, le risposte allo stress ischemico e i modelli di malattie proliferative.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aldoc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aldoc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aldoc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldolase C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aldoc per lo studio della segnalazione di Aldolase C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aldoc critici per la funzione di Aldolase C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aldoc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldolase C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aldolase C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aldoc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldolase C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aldolase C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aldoc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aldoc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.