Plasmide Double Nickase (h) Aldolase B: sc-402714-NIC

ALDOB code l'aldolase B, une aldolase du fructose-bisphosphate qui catalyse des étapes clés du métabolisme du fructose et de la glycolyse/néoglucogenèse en clivant le fructose-1-phosphate et le fructose-1,6-bisphosphate en trioses phosphates. Dans le foie, le rein et l'épithélium intestinal humains, l'aldolase B soutient le flux de carbone vers la production d'énergie et les voies biosynthétiques, reliant la prise en charge du fructose alimentaire à l'homéostasie centrale des glucides. Une expression ou une activité altérée d'ALDOB perturbe le catabolisme du fructose et la signalisation métabolique en aval, et est associée à des erreurs innées du métabolisme telles que l'intolérance héréditaire au fructose, ainsi qu'à des contextes plus larges de dérégulation métabolique étudiés en biologie des hépatocytes. Par conséquent, ALDOB est fréquemment utilisé comme marqueur fonctionnel de la différenciation hépatique et comme nœud pour l'étude de programmes transcriptionnels sensibles aux nutriments.

Aldolase B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALDOB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALDOB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALDOB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALDOB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.