Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aldolase B: sc-402714-ACT

ALDOB code l’aldolase B humaine, une enzyme glycolytique et fructolytique qui catalyse le clivage du fructose-1,6-bisphosphate et du fructose-1-phosphate, contribuant à l’utilisation des glucides et au métabolisme énergétique. L’activité de l’aldolase B est centrale dans la prise en charge hépatique du fructose et s’intègre à la glycolyse, à la néoglucogenèse et, plus largement, au contrôle des flux de carbone. Une expression ou une fonction altérée d’ALDOB est liée à des erreurs innées du métabolisme du fructose et a été associée à une dérégulation métabolique affectant la physiologie du foie. En tant que nœud métabolique, ALDOB est fréquemment évalué dans des études sur la détection des nutriments, la différenciation des hépatocytes et le remodelage des voies dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Aldolase B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALDOB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aldolase B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALDOB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALDOB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aldolase B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALDOB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aldolase B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aldolase B dans les cellules tumorales présentant une expression de ALDOB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.