Aldolase A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419082

Visão geral

Aldoa codifica a aldolase A, uma enzima glicolítica que catalisa a clivagem reversível da frutose-1,6-bisfosfato em gliceraldeído-3-fosfato e fosfato de di-hidroxiacetona, ligando a utilização de glicose à produção de ATP e à geração de precursores biossintéticos. Em células de camundongo, a aldolase A sustenta o fluxo metabólico pela glicólise e se integra a programas mais amplos de metabolismo do carbono que influenciam o equilíbrio redox e a proliferação celular. Além do metabolismo, a aldolase A tem sido implicada na organização do citoesqueleto por meio de interações com a dinâmica da actina, conectando a produção de energia à forma e à motilidade celular. Alterações na expressão de ALDOA e a reprogramação glicolítica são frequentemente estudadas em contextos de estresse metabólico e fenótipos associados a doenças, incluindo adaptação metabólica associada a tumores e déficits funcionais relacionados ao músculo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Aldolase A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Aldoa em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Aldoa, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Aldoa na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Aldolase A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Aldoa para a investigação da sinalização de Aldolase A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Aldoa críticos para a função Aldolase A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Aldoa para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Aldolase A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Aldolase A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Aldoa. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Aldolase A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Aldolase A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Aldoa para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Aldoa definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.