Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 (h): sc-406553

Présentation

Le gène humain **ALDH6A1** code la **déshydrogénase mitochondriale du semi-aldéhyde méthylmalonique**, une enzyme **dépendante du NAD(P)+** qui oxyde le semi-aldéhyde méthylmalonique en **propionyl‑CoA** lors du catabolisme de la **valine** et des **pyrimidines**. En alimentant le métabolisme du propionyl‑CoA et les voies anaplérotiques en aval, **ALDH6A1** relie le renouvellement des acides aminés à chaîne ramifiée à l’homéostasie énergétique mitochondriale et à l’équilibre rédox. Une perturbation de l’activité d’ALDH6A1 peut modifier les profils d’acides organiques et les réponses au stress mitochondrial, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des erreurs innées du métabolisme et, plus largement, des phénotypes de dysfonction mitochondriale. Son expression et sa fonction suscitent aussi de l’intérêt dans les contextes de reprogrammation métabolique où le catabolisme des acides aminés soutient des états prolifératifs ou adaptés au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALDH6A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALDH6A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALDH6A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALDH6A1 pour l'étude de la signalisation de Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALDH6A1 essentiels à la fonction de Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALDH6A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALDH6A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 plasmide HDR (h) et le Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALDH6A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALDH6A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.