Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2: sc-400809-ACT

L’ALDH2 humain code l’aldéhyde déshydrogénase mitochondriale 2, une enzyme NAD(P)+‑dépendante qui oxyde des aldéhydes réactifs tels que l’acétaldéhyde et des aldéhydes issus de la peroxydation lipidique (par exemple le 4‑hydroxynonénal) en leurs acides correspondants. En limitant la formation d’adduits d’aldéhydes sur les protéines, les lipides et l’ADN, l’ALDH2 contribue à l’homéostasie redox mitochondriale, à la protéostasie et aux réponses cellulaires au stress liées aux voies de détoxification des ROS. L’activité de l’ALDH2 est étroitement liée au métabolisme de l’éthanol et, plus largement, à l’élimination des aldéhydes dans des contextes cardiométaboliques et neurobiologiques, où une altération de la fonction peut aggraver la signalisation associée aux dommages oxydatifs. Des variations génétiques ou une diminution de la fonction d’ALDH2 ont été associées à une susceptibilité modifiée à des phénotypes liés à l’alcool ainsi qu’à des processus pertinents pour la maladie impliquant un dysfonctionnement mitochondrial et l’inflammation.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALDH2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALDH2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALDH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALDH2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ALDH2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.