Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m): sc-419078

Présentation

Aldh1a1 code l’aldéhyde déshydrogénase 1-A1 (ALDH1A1), une enzyme cytosolique dépendante du NAD(P)+ qui oxyde une large gamme d’aldéhydes endogènes et xénobiotiques en leurs acides carboxyliques correspondants, contribuant ainsi à la détoxification cellulaire et à l’homéostasie redox. Dans les tissus murins, ALDH1A1 participe au métabolisme des rétinoïdes en catalysant la conversion du rétinaldéhyde en acide rétinoïque, reliant ce gène à des programmes transcriptionnels qui influencent la différenciation, le métabolisme et les réponses au stress oxydant. L’activité d’ALDH1A1 s’inscrit également à l’interface des voies de peroxydation lipidique et d’élimination des aldéhydes réactifs, aidant à limiter le stress carbonylé et la formation en aval d’adduits sur les protéines et l’ADN. Des modifications de l’expression ou de la fonction d’ALDH1A1 ont été associées à des phénotypes liés au stress oxydant et sont fréquemment étudiées, notamment dans des contextes tels que la dysrégulation métabolique, la neurobiologie et la biologie des cellules tumorales, comme marqueur de l’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aldh1a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aldh1a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aldh1a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aldh1a1 pour l'étude de la signalisation de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aldh1a1 essentiels à la fonction de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aldh1a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aldh1a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 plasmide HDR (m) et le Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aldh1a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aldh1a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.