Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ALCAM Double Nickase Plasmid (h): sc-418418-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ALCAM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ALCAM Double-Nickase-Plasmid (h) und ALCAM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ALCAM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ALCAM: sc-74558
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ALCAM Double Nickase Plasmid (h) | sc-418418-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALCAM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418418-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALCAM (activated leukocyte cell adhesion molecule, CD166) ist ein Zelloberflächen‑Glykoprotein der Immunglobulin‑Superfamilie, das über homophile ALCAM–ALCAM‑ sowie heterophile ALCAM–CD6‑Interaktionen die Zell‑Zell‑Adhäsion reguliert. Es trägt zum Leukozyten‑Trafficking und zur Organisation der immunologischen Synapse bei und beeinflusst Zellmigration und Gewebearchitektur durch adhäsionsabhängige Signalübertragung und Zytoskelett‑Remodeling. In menschlichen Geweben wird die ALCAM‑Expression häufig in endothelialen und epithelialen Kompartimenten sowie in Subpopulationen von Immunzellen untersucht, wo sie Entzündungsreaktionen und Barrierefunktionen modulieren kann. Eine Fehlregulation von ALCAM wurde in mehreren Tumorkontexten mit veränderter Adhäsion, Invasion und metastatischem Verhalten in Verbindung gebracht, was ALCAM zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung adhäsionsgetriebener Phänotypen und Interaktionen mit dem Mikroumfeld macht.
ALCAM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ALCAM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ALCAM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ALCAM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ALCAM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.