Plasmide Double Nickase (m) Akt2: sc-419072-NIC

Akt2 code la kinase sérine/thréonine AKT2, un effecteur central de la signalisation PI3K qui relie les signaux provenant des facteurs de croissance et des récepteurs de l’insuline au contrôle en aval de l’absorption du glucose, de la synthèse du glycogène, du métabolisme lipidique et de la survie cellulaire. Dans les tissus murins, l’activité d’AKT2 influence le trafic membranaire des transporteurs de glucose, les programmes anaboliques régulés par mTORC1 et l’inhibition, dépendante de la phosphorylation, de facteurs pro-apoptotiques tels que les facteurs de transcription de la famille FOXO. Une signalisation AKT2 dérégulée est associée à des altérations de la sensibilité à l’insuline et de l’homéostasie métabolique, et l’activation aberrante de cette voie est fréquemment étudiée dans des modèles de prolifération, de réponses au stress et de signalisation oncogénique. En tant que nœud intégrant les signaux des récepteurs à activité tyrosine kinase avec les circuits métaboliques et du cycle cellulaire, Akt2 est largement étudié dans les adipocytes, les hépatocytes, les myocytes et dans divers contextes de cellules cancéreuses.

Akt2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Akt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Akt2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Akt2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Akt2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.