Plasmide Double Nickase (h) Akt1: sc-400014-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Akt1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Akt1 Double Nickase (h) et le plasmide Akt1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AKT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Akt1 Antibody (G-5): sc-55523
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Akt1 | sc-400014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Akt1 | sc-400014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKT1 code la kinase sérine/thréonine Akt1, un effecteur central de la signalisation PI3K qui intègre les signaux des facteurs de croissance et de l’insuline afin de réguler la survie cellulaire, la prolifération, le métabolisme et la synthèse protéique. Akt1 phosphoryle de nombreux substrats impliqués dans le contrôle de l’apoptose, la progression du cycle cellulaire et la traduction médiée par mTORC1, et coordonne les réponses cellulaires au stress oxydatif ainsi qu’à la disponibilité des nutriments. Une signalisation AKT1 dérégulée est associée à la transformation oncogénique et à la résistance aux traitements, et une activité altérée d’Akt1 a également été impliquée dans des phénotypes métaboliques et neurodéveloppementaux. Dans les cellules humaines, les perturbations de la voie AKT1 sont fréquemment étudiées dans le contexte de l’activation des récepteurs à activité tyrosine kinase, de la perte de PTEN et des nœuds de signalisation en aval impliquant FOXO, GSK3 et TSC2.
Akt1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AKT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AKT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AKT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AKT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.