Plasmide CRISPR d'Activation (h) AKR7A2: sc-403377-ACT

AKR7A2 code une aldo-céto réductase cytosolique qui catalyse la réduction, dépendante du NADPH, d’aldéhydes et de cétones réactifs, contribuant ainsi à la défense cellulaire contre le stress électrophile et oxydatif. En détoxifiant des aldéhydes issus de la peroxydation lipidique et des métabolites de xénobiotiques, AKR7A2 participe à l’homéostasie redox et au maintien de l’intégrité du protéome cellulaire. Son activité s’inscrit dans les réseaux de détoxification des aldéhydes et dans des voies plus larges de réponse au stress, qui influencent la sensibilité à l’exposition aux toxiques et la signalisation inflammatoire. Des modifications de la régulation d’AKR7A2 ont été étudiées dans des contextes où le stress carbonylé et le métabolisme des xénobiotiques influencent des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment la dysfonction hépatique et des états de stress oxydatif associés aux tumeurs.

AKR7A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKR7A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AKR7A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKR7A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKR7A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AKR7A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKR7A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AKR7A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AKR7A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de AKR7A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.