AKR7A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403377-ACT

AKR7A2 codifica uma aldo-ceto redutase citosólica que catalisa a redução, dependente de NADPH, de aldeídos e cetonas reativos, contribuindo para a defesa celular contra o stress eletrofílico e oxidativo. Ao desintoxicar aldeídos derivados da peroxidação lipídica e metabolitos xenobióticos, a AKR7A2 contribui para a homeostase redox e para a manutenção da integridade do proteoma celular. A sua atividade cruza-se com redes de desintoxicação de aldeídos e vias mais amplas de resposta ao stress que moldam a suscetibilidade à exposição a toxinas e à sinalização inflamatória. A regulação alterada da AKR7A2 tem sido investigada em contextos em que o stress carbonílico e o metabolismo de xenobióticos influenciam fenótipos relevantes para a doença, incluindo disfunção hepática e estados de stress oxidativo associados a tumores.

AKR7A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AKR7A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AKR7A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AKR7A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AKR7A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AKR7A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AKR7A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AKR7A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AKR7A2 em células tumorais com expressão de AKR7A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.