Plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 79 (h): sc-402647

Présentation

AKAP5 code pour AKAP 79, une protéine d’ancrage de la PKA associée à la membrane, qui organise des complexes de signalisation multiprotéiques en arrimant la PKA, ainsi que des phosphatases telles que la calcineurine et PP2B, à des microdomaines subcellulaires définis. En servant d’échafaudage pour des kinases, des phosphatases et des récepteurs, AKAP 79 module l’amplitude et la durée des signaux dans des voies contrôlant la plasticité synaptique, le trafic des récepteurs et la phosphorylation dépendante de l’activité, notamment dans des processus régulés par le calcium et l’AMPc. Dans les neurones et les tissus excitables, cette régulation spatiale influence la modulation des canaux ioniques et les réponses transcriptionnelles en aval. Une signalisation d’AKAP 79 dérégulée a été impliquée dans des altérations de l’excitabilité neuronale et du fonctionnement des réseaux, faisant d’AKAP5 un nœud pertinent pour étudier des mécanismes liés à la biologie des maladies neurologiques et à la signalisation sensible au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 79 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AKAP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AKAP5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AKAP5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AKAP 79.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AKAP5 pour l'étude de la signalisation de AKAP 79, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AKAP5 essentiels à la fonction de AKAP 79
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AKAP5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AKAP 79 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AKAP 79 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AKAP5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AKAP 79 plasmide HDR (h) et le AKAP 79 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AKAP5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AKAP5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.