Plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP4 (m): sc-421158

Présentation

Itch (AIP4) code une ligase E3 ubiquitine de type HECT qui catalyse l’ubiquitination de protéines cibles afin de contrôler leur stabilité et leur trafic, modulant ainsi la protéostasie et la durée des signaux. Dans les cellules murines, AIP4 participe à la régulation, dépendante de l’ubiquitine, des voies de signalisation immunitaires, notamment en modulant NF-κB et des complexes proximaux aux récepteurs apparentés, influençant ainsi la production de cytokines et l’homéostasie inflammatoire. Itch contribue également à la différenciation des lymphocytes T et à la tolérance périphérique via le renouvellement de régulateurs transcriptionnels et d’adaptateurs de signalisation. Une activité d’Itch dérégulée a été associée à des déséquilibres immunitaires, à des phénotypes inflammatoires et à une altération du contrôle des voies de croissance et de survie cellulaires, pertinentes pour la biologie du cancer et les interactions neuro-immunes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Itch dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Itch, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Itch à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AIP4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Itch pour l'étude de la signalisation de AIP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Itch essentiels à la fonction de AIP4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Itch pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AIP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AIP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Itch. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AIP4 plasmide HDR (m) et le AIP4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Itch pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Itch définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.