AIP4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421158

Visão geral

Itch (AIP4) codifica uma ligase E3 de ubiquitina do tipo HECT que catalisa a ubiquitinação de proteínas-alvo para controlar sua estabilidade e tráfego, moldando a proteostase e a duração dos sinais. Em células de camundongo, a AIP4 participa da regulação dependente de ubiquitina de vias de sinalização imune, incluindo a modulação do NF-κB e de complexos proximais ao receptor relacionados, influenciando assim a produção de citocinas e a homeostase inflamatória. Itch também contribui para a diferenciação de células T e para a tolerância periférica por meio da degradação de reguladores transcricionais e adaptadores de sinalização. A atividade desregulada de Itch tem sido associada a desequilíbrio imune, fenótipos inflamatórios e alterações no controle de vias de crescimento e sobrevivência celular relevantes para a biologia do câncer e para interações neuroimunes.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AIP4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Itch em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Itch, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Itch na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AIP4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Itch para a investigação da sinalização de AIP4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Itch críticos para a função AIP4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Itch para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AIP4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo AIP4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Itch. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AIP4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR AIP4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Itch para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Itch definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.