Aiolos CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400764

Übersicht

IKZF3 kodiert Aiolos, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor aus der Ikaros-Familie, der die Lymphozytendifferenzierung und die Immunhomöostase durch die Kontrolle linien-/zelltypspezifischer Genexpressionsprogramme reguliert. Aiolos moduliert die Chromatinzugänglichkeit sowie Netzwerke der transkriptionellen Repression und Aktivierung, die die Reifung von B‑Zellen, die Entwicklung von Plasmazellen und funktionelle Zustände von T‑Zellen prägen, indem er Signale nachgeschalteter Antigenrezeptor‑Signalwege integriert. Eine veränderte IKZF3-Aktivität wurde mit fehlregulierten Immunantworten und gestörten Schicksalsentscheidungen lymphoider Zellen in Verbindung gebracht, was sie für Studien zu Autoimmunität, Entzündung und der Biologie hämatologischer Malignome relevant macht. In menschlichen Zellen beeinflusst eine Aiolos‑abhängige transkriptionelle Schaltkreislaufarchitektur die Ausgänge der Zytokinsignalgebung und die Kontrolle von Aktivierungs‑ gegenüber Differenzierungsprogrammen.

Das Aiolos CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IKZF3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IKZF3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IKZF3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aiolos-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IKZF3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aiolos-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IKZF3-Exone abzielen, die für die Aiolos-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IKZF3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aiolos CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aiolos CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IKZF3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aiolos HDR-Plasmid (h) und Aiolos HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IKZF3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IKZF3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.