Plasmide CRISPR d'Activation (h) AHCYL1: sc-417109-ACT

Le gène humain **AHCYL1** code l’adénosylhomocystéinase-like 1, un paralogue non catalytique de l’hydrolase de la S-adénosylhomocystéine, qui agit comme composant régulateur reliant la capacité de transmethylation à la signalisation intracellulaire. AHCYL1 a été impliqué dans la modulation de la dynamique du calcium dépendante du récepteur de l’inositol 1,4,5-trisphosphate, ainsi que dans des programmes associés tels que la signalisation liée au réticulum endoplasmique (RE), l’adaptation métabolique et les réponses au stress. Par ces connexions, l’expression d’AHCYL1 peut influencer les sorties épigénétiques et transcriptionnelles en aval des voies sensibles à la méthylation et au Ca²⁺. Une dérégulation de l’équilibre de méthylation et de la signalisation Ca²⁺ est fréquemment observée dans des contextes inflammatoires, neurobiologiques et oncogéniques, faisant d’AHCYL1 un nœud utile pour des investigations mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

AHCYL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AHCYL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AHCYL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AHCYL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AHCYL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AHCYL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AHCYL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AHCYL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AHCYL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de AHCYL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.