AGRP Double Nickaseプラスミド (h): sc-402410-NIC

AGRPはアグーチ関連タンパク質（agouti-related protein）をコードしており、主に視床下部ニューロンで産生される神経ペプチドです。メラノコルチン受容体、とりわけMC3RおよびMC4Rに対する内因性のアンタゴニスト／逆作動薬として機能します。メラノコルチンシグナル伝達に拮抗することで、AGRPはPOMC由来ペプチドやレプチン／インスリン応答性回路を含む相互連関した経路を介して、エネルギー恒常性、摂食行動、神経内分泌応答の調節に寄与します。AGRPシグナルの変調は、食欲制御や体重調節の破綻に関与するとされ、代謝疾患の生物学や視床下部回路の研究文脈で頻繁に調べられています。また、分泌性ペプチドであることから、AGRPは神経系におけるニューロペプチドのプロセシング、分泌、受容体介在性シグナル伝達を研究するための扱いやすいモデルにもなります。

AGRP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AGRP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AGRP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AGRPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AGRPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。