Plasmide CRISPR/Cas9 KO AGRP (m): sc-419045

Présentation

Le neuropeptide lié à l’agouti (AGRP), codé par le gène murin *Agrp*, est un neuropeptide orexigène exprimé principalement par des neurones du noyau arqué qui régulent l’équilibre énergétique et le comportement alimentaire. AGRP agit comme un antagoniste endogène ou un agoniste inverse des récepteurs des mélanocortines, en particulier MC3R et MC4R, en s’opposant à la signalisation mélanocortinergique anorexigène afin de moduler l’appétit, l’adiposité et le taux métabolique. Les neurones exprimant *Agrp* intègrent des signaux endocriniens et nutritionnels et s’articulent avec des circuits hypothalamiques contrôlant l’homéostasie du glucose et les sorties neuroendocrines. Le dérèglement des voies liées à AGRP est fréquemment étudié dans des modèles d’obésité, de syndrome métabolique, de phénotypes associés au diabète et de modifications du comportement alimentaire liées au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AGRP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agrp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agrp, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agrp à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AGRP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agrp pour l'étude de la signalisation de AGRP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Agrp essentiels à la fonction de AGRP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agrp pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AGRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AGRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agrp. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AGRP plasmide HDR (m) et le AGRP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agrp pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agrp définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.