Plasmide CRISPR d'Activation (h) AGRP: sc-402410-ACT

L’AGRP humain (neuropeptide lié à l’agouti) code un neuropeptide orexigène principalement produit par des neurones hypothalamiques qui régulent l’homéostasie énergétique et le comportement alimentaire. AGRP agit comme agoniste inverse/antagoniste des récepteurs des mélanocortines, en particulier MC3R et MC4R, en s’opposant à la signalisation de l’α‑MSH afin de moduler des voies neuroendocriniennes dépendantes de l’AMPc qui contrôlent l’appétit, la thermogenèse et le métabolisme du glucose. Par son intégration à des circuits neuronaux sensibles à la leptine, à la ghréline et à l’insuline, AGRP contribue à la détection des nutriments et aux réponses adaptatives au jeûne. Une signalisation AGRP dérégulée a été associée à des phénotypes liés à l’obésité, à des déséquilibres métaboliques et à une altération du contrôle neuroendocrinien du poids corporel.

AGRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGRP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AGRP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGRP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGRP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AGRP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGRP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AGRP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AGRP dans les cellules tumorales présentant une expression de AGRP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.