Plasmide CRISPR/Cas9 KO AFP/Alpha fetoprotein (h): sc-400355

Présentation

AFP (alpha-fœtoprotéine) code une glycoprotéine oncofœtale sécrétée, fortement exprimée au cours du développement fœtal et largement réduite au silence après la naissance, où elle contribue à la régulation des programmes de croissance et de différenciation. Dans les tissus adultes, la réexpression d’AFP est fréquemment associée à des états de lignée hépatique altérés ainsi qu’au remodelage de la matrice extracellulaire et des signalisations immunitaires au sein du microenvironnement tumoral. L’expression d’AFP est utilisée comme caractéristique moléculaire dans les études du carcinome hépatocellulaire et de la biologie des tumeurs germinales, et elle est couramment évaluée en parallèle de voies liées à la différenciation des hépatocytes, à la prolifération et aux réponses au stress. En tant que protéine circulante, l’AFP constitue également un indicateur facile à mesurer pour étudier la régulation transcriptionnelle et la dynamique de la voie de sécrétion dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AFP/Alpha fetoprotein (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AFP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AFP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AFP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AFP/Alpha fetoprotein.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AFP pour l'étude de la signalisation de AFP/Alpha fetoprotein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AFP essentiels à la fonction de AFP/Alpha fetoprotein
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AFP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AFP/Alpha fetoprotein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AFP/Alpha fetoprotein plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AFP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AFP/Alpha fetoprotein plasmide HDR (h) et le AFP/Alpha fetoprotein (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AFP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AFP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.