AFG3L2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404565-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AFG3L2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AFG3L2 Double-Nickase-Plasmid (h) und AFG3L2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AFG3L2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AFG3L2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404565-NIC | 20 µg | $410.00 |
AFG3L2 kodiert eine AAA+-Metalloprotease der inneren Mitochondrienmembran, die den m-AAA-Proteasekomplex bildet und eine ATP-abhängige Qualitätskontrolle von Proteinen auf der dem Intermembranraum zugewandten Seite der inneren Membran unterstützt. Durch die Regulation von Abbau und Reifung von Komponenten der Atmungskette sowie von Substraten im Zusammenhang mit dem mitochondrialen Ribosom trägt AFG3L2 zur Effizienz der oxidativen Phosphorylierung, zur mitochondrialen Proteostase und zu stressadaptiver Signalübertragung bei. Verlust oder Funktionsstörung von AFG3L2 beeinträchtigt mitochondriale Dynamik und Bioenergetik, fördert die Anreicherung fehlgefalteter Proteine und stört die Organellenhomöostase. Varianten in AFG3L2 sind mit neurodegenerativen Phänotypen assoziiert und verknüpfen die Aktivität mitochondrialer Proteasen mit neuronaler Vulnerabilität und dem Erhalt von Axonen.
AFG3L2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AFG3L2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AFG3L2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AFG3L2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AFG3L2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.