Plasmide CRISPR/Cas9 KO AFF4 (h): sc-406238

Présentation

AFF4 (membre 4 de la famille AFF4/FMR2) code un régulateur transcriptionnel nucléaire qui constitue un composant central du Super Elongation Complex (SEC), coordonnant la transition de l’ARN polymérase II vers une élongation productive. Par ses interactions avec des facteurs d’élongation tels que P-TEFb et les protéines ELL, AFF4 favorise l’induction rapide de gènes répondant aux stimuli et influence des programmes transcriptionnels associés à la chromatine. Le contrôle de l’élongation transcriptionnelle dépendant d’AFF4 contribue à la régulation de l’identité cellulaire, de la prolifération et des voies de réponse au stress. Une activité du SEC dérégulée et une altération des circuits transcriptionnels associés à AFF4 sont impliquées dans des programmes d’expression génique oncogéniques et dans d’autres maladies dues à une élongation aberrante de l’ARN polymérase II.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AFF4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AFF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AFF4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AFF4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AFF4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AFF4 pour l'étude de la signalisation de AFF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AFF4 essentiels à la fonction de AFF4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AFF4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AFF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AFF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AFF4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AFF4 plasmide HDR (h) et le AFF4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AFF4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AFF4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.