Plásmido Doble Nickase (h) AFAP-1L1: sc-407503-NIC

AFAP1L1 codifica AFAP-1L1, una proteína adaptadora asociada a los filamentos de actina que conecta complejos de señalización con la remodelación del citoesqueleto. AFAP-1L1 participa en procesos como la organización de las fibras de estrés, la dinámica de las adhesiones focales y los cambios en la forma celular mediante interacciones que acoplan la señalización de quinasas de la familia Src con la maquinaria reguladora de la actina. Al modular programas de adhesión y motilidad, AFAP1L1 se estudia con frecuencia en el contexto del comportamiento invasivo, fenotipos similares a la transición epitelio-mesenquimal y modelos de diseminación metastásica. Se han descrito alteraciones en la expresión de AFAP1L1 o en la activación de sus vías en múltiples tipos de tumores, lo que respalda su utilidad como un nodo para estudios mecanísticos de la migración y de las redes de señalización del citoesqueleto.

AFAP-1L1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AFAP1L1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AFAP1L1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AFAP1L1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AFAP1L1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.