Plásmido CRISPR de Activación (h) ADSL: sc-404936-ACT

El gen humano **ADSL** codifica la **liasa de adenilosuccinato**, una enzima bifuncional de la biosíntesis *de novo* de purinas que cataliza la escisión del adenilosuccinato para generar **AMP** y **fumarato**, así como la conversión de **SAICAR** en **AICAR**. A través de estas reacciones, ADSL contribuye a la homeostasis de nucleótidos y conecta el metabolismo de las purinas con el metabolismo central del carbono mediante la producción de fumarato, influyendo en la proliferación celular y el balance energético. La alteración de la actividad de ADSL desestabiliza los reservorios de nucleótidos de purina y puede modificar la señalización metabólica asociada al control del crecimiento. Las variantes en ADSL se asocian con la deficiencia de liasa de adenilosuccinato, un trastorno metabólico caracterizado por la acumulación de succinilpurinas, con efectos posteriores sobre el neurodesarrollo y la fisiología sistémica.

ADSL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADSL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADSL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADSL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADSL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADSL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADSL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADSL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADSL en células tumorales con expresión de ADSL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.