adseverin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422815

Descripción general

Scin codifica adseverina, una proteína de la superfamilia gelsolina que, regulada por Ca²⁺, corta y tapa filamentos de actina y remodela la dinámica de la actina filamentosa de manera dependiente del estímulo. Al promover el desensamblaje y la reorganización rápidos de los filamentos de actina, la adseverina respalda procesos como el tráfico de membrana, los cambios en la forma celular y la secreción regulada, particularmente en contextos de células hematopoyéticas y secretoras. Su actividad se entrecruza con la señalización del calcio y con vías de control del citoesqueleto que influyen en la adhesión, la migración y la exocitosis de vesículas. La remodelación desregulada de la actina y la secreción dependiente de calcio se implican con frecuencia en fenotipos inflamatorios y neoplásicos, lo que convierte a Scin en un nodo útil para estudios mecanísticos de la biología de enfermedades vinculadas al citoesqueleto en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO adseverin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scin en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scin junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scin tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína adseverin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scin para la investigación de la señalización de adseverin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scin críticos para la función de adseverin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scin para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido adseverin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido adseverin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scin. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR adseverin (m) y el plásmido HDR adseverin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scin para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scin definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.