Plasmide CRISPR/Cas9 KO adseverin (m): sc-422815

Présentation

Scin code l’adseverine, une protéine de sectionnement et de coiffage de l’actine régulée par le Ca²⁺, appartenant à la superfamille des gelsolines, qui remodèle la dynamique de l’actine filamentaire de manière dépendante des stimuli. En favorisant une désassemblage rapide et une réorganisation des filaments d’actine, l’adseverine soutient des processus tels que le trafic membranaire, les changements de forme cellulaire et la sécrétion régulée, en particulier dans des contextes cellulaires hématopoïétiques et sécrétoires. Son activité s’inscrit à l’interface de la signalisation calcique et des voies de contrôle du cytosquelette qui influencent l’adhérence, la migration et l’exocytose des vésicules. Un remodelage de l’actine dérégulé et une sécrétion dépendante du calcium sont fréquemment impliqués dans des phénotypes inflammatoires et néoplasiques, faisant de Scin un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie des maladies liées au cytosquelette dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO adseverin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scin dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scin, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scin à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine adseverin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scin pour l'étude de la signalisation de adseverin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Scin essentiels à la fonction de adseverin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scin pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le adseverin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le adseverin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scin. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le adseverin plasmide HDR (m) et le adseverin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scin pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scin définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.