Plasmide Double Nickase (h) ADRP: sc-400802-NIC

PLIN2 code la protéine liée à la différenciation adipocytaire (ADRP), un membre de la famille des périlipines associé aux gouttelettes lipidiques, qui recouvre les organites de stockage des lipides neutres et régule le trafic des acides gras, le dépôt de triglycérides et la lipolyse. ADRP participe à la biogenèse et au renouvellement des gouttelettes lipidiques via des interactions avec des programmes lipogéniques contrôlés par la signalisation PPAR et des voies cellulaires de détection des nutriments, modulant ainsi le métabolisme oxydatif et les réponses inflammatoires. Une expression altérée de PLIN2 et l'accumulation de gouttelettes lipidiques sont fréquemment étudiées dans des contextes de stéatose hépatique, de dysfonction métabolique associée à l'obésité, de formation de cellules spumeuses des macrophages et de stress lipidique dans les cellules cancéreuses. En tant que marqueur et régulateur du stockage lipidique intracellulaire, ADRP est largement utilisée pour explorer l'homéostasie lipidique, la dynamique des organites et la reprogrammation métabolique dans des modèles cellulaires humains.

ADRP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLIN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLIN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLIN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLIN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.