Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADM2 (h): sc-403726

Présentation

ADM2 (adrénomédulline 2, également appelée intermédiine) code une hormone peptidique sécrétée de la famille des peptides apparentés au gène de la calcitonine (CGRP), qui signale via le récepteur CLR (CALCRL) avec des co-récepteurs RAMP afin de moduler des réponses dépendantes de l’axe AMPc/PKA. ADM2 contribue à la régulation du tonus vasculaire, au fonctionnement des cellules endothéliales et des cellules musculaires lisses, à l’homéostasie hydro-électrolytique et à la signalisation induite par le stress dans la physiologie cardiovasculaire et rénale. Dans les contextes cellulaires, ADM2 peut influencer des programmes angiogéniques, des voies liées au monoxyde d’azote et l’équilibre des médiateurs inflammatoires, en intégrant des signaux paracrines/autocrines à la signalisation des GPCR. Une signalisation ADM2 dérégulée a été associée dans la littérature à des dysfonctions cardiométaboliques et vasculaires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de recherche cardiovasculaire, rénale et immunométabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADM2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADM2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADM2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADM2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADM2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADM2 pour l'étude de la signalisation de ADM2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADM2 essentiels à la fonction de ADM2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADM2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADM2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADM2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADM2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADM2 plasmide HDR (h) et le ADM2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADM2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADM2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.