Adipsin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401782

Übersicht

Komplementfaktor D (CFD), auch als Adipsin bekannt, ist eine Serinprotease, die den alternativen Komplementweg reguliert, indem sie Faktor B spaltet, wenn dieser an C3b gebunden ist. Dadurch wird die Assemblierung der C3-Konvertase gefördert und die Komplementaktivierung verstärkt. Beim Menschen wird CFD stark im Fettgewebe exprimiert und verknüpft die angeborene Immunüberwachung mit der metabolischen Homöostase, indem es den Entzündungsgrundtonus und die Adipokin-Signalgebung beeinflusst. Eine veränderte CFD-Aktivität wurde mit fehlregulierter, komplementgetriebener Entzündung in Verbindung gebracht und im Kontext von Umbauprozessen des Fettgewebes, kardiometabolischen Merkmalen und immunvermittelten Gewebeschädigungen untersucht. Als sezerniertes Enzym stellt Adipsin einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um die Wechselwirkungen zwischen Komplementproteolyse, Zytokinnetzwerken und zellulären Stressantworten zu analysieren.

Das Adipsin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CFD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CFD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CFD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adipsin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CFD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adipsin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CFD-Exone abzielen, die für die Adipsin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CFD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adipsin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Adipsin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CFD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adipsin HDR-Plasmid (h) und Adipsin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CFD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CFD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.