Plasmide Double Nickase (h) ADH5: sc-403859-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ADH5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ADH5 Double Nickase (h) et le plasmide ADH5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADH5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ADH5 Antibody (B-1): sc-518202
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ADH5 | sc-403859-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ADH5 | sc-403859-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADH5 (alcool déshydrogénase 5), également connue sous le nom de réductase de la S‑nitrosoglutathion, est une déshydrogénase cytosolique qui catalyse la réduction, dépendante du NADH, de la S‑nitrosoglutathion et d’aldéhydes apparentés. En contrôlant la S‑nitrosylation des protéines et la biodisponibilité de l’oxyde nitrique, ADH5 influence l’homéostasie redox, les réponses antioxydantes et la signalisation du stress nitrosatif. Cette activité s’articule avec le métabolisme du glutathion et des voies de détoxification qui modulent la signalisation inflammatoire et la résistance cellulaire aux dommages oxydatifs. Des altérations de la fonction d’ADH5 ont été associées à une dérégulation du stress nitrosatif et ont été étudiées dans des contextes pertinents pour diverses maladies, notamment la biologie des cancers, l’inflammation cardiovasculaire et pulmonaire, ainsi que des processus neurodégénératifs.
ADH5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADH5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADH5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADH5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADH5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.