Plasmide Double Nickase (h) ADHγ: sc-402261-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ADHγ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ADHγ Double Nickase (h) et le plasmide ADHγ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADH1C. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ADHγ | sc-402261-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ADHγ | sc-402261-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADH1C code pour l’alcool déshydrogénase humaine gamma (ADHγ), une oxydoréductase cytosolique dépendante du zinc qui catalyse l’oxydation, dépendante du NAD⁺, de l’éthanol et d’autres alcools aliphatiques en leurs aldéhydes correspondants. En tant que composante du cluster de gènes ADH, ADHγ contribue au métabolisme hépatique et gastro-intestinal des xénobiotiques et influence l’équilibre rédox cellulaire via la production de NADH. Les variations ou une régulation altérée d’ADH1C peuvent moduler l’exposition à l’acétaldéhyde ainsi que le stress oxydatif en aval et les voies de détoxification des aldéhydes, reliant cette enzyme à des phénotypes de susceptibilité dans les lésions tissulaires liées à l’alcool et, plus largement, à des dérégulations métaboliques. ADH1C est également utilisé comme marqueur fonctionnel dans des études de différenciation des hépatocytes, de métabolisme hépatique et de cinétique enzymatique entre isoformes d’ADH.
ADHγ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADH1C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADH1C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADH1C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADH1C.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.