Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADHγ (h): sc-402261

Présentation

ADH1C code la sous-unité gamma de l’alcool déshydrogénase humaine (ADHγ), une oxydoréductase cytosolique dépendante du zinc qui catalyse l’oxydation de l’éthanol et d’autres alcools et aldéhydes à chaîne courte, dépendante du NAD⁺. Cette activité enzymatique soutient le métabolisme de l’alcool et des rétinoïdes et s’articule avec l’homéostasie redox cellulaire en influençant l’équilibre NADH/NAD⁺ ainsi que les voies en aval de prise en charge des aldéhydes. Des variations ou une dérégulation du flux métabolique lié à ADH1C peuvent moduler la charge en acétaldéhyde et les réponses au stress oxydatif, des processus impliqués dans les lésions hépatiques, le métabolisme des carcinogènes et des phénotypes métaboliques plus larges. En tant que composante du cluster de gènes ADH, ADHγ est également pertinente pour les études de détoxification spécifique aux tissus et de traitement des xénobiotiques dans la biologie du foie et des voies aérodigestives supérieures.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADHγ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADH1C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADH1C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADH1C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADHγ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADH1C pour l'étude de la signalisation de ADHγ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADH1C essentiels à la fonction de ADHγ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADH1C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADHγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADHγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADH1C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADHγ plasmide HDR (h) et le ADHγ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADH1C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADH1C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.