ADF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417540

Descripción general

El gen humano **DSTN** codifica el factor despolimerizante de actina (**ADF**), una proteína central de unión a actina que corta y despolimeriza la **F-actina** para sostener el recambio de filamentos y mantener la homeostasis del citoesqueleto. Al regular la dinámica de la actina, ADF respalda procesos como la remodelación de lamelipodios, la endocitosis, la citocinesis y la migración celular, e interactúa funcionalmente con la señalización de GTPasas de la familia Rho y con las redes de fosforilación reguladora de cofilina/ADF. La remodelación alterada de actina se asocia con defectos en la integridad de la barrera epitelial, la morfogénesis neuronal y el comportamiento celular invasivo, lo que convierte a DSTN en un nodo relevante para estudiar fenotipos de enfermedad impulsados por el citoesqueleto. Por tanto, la perturbación de DSTN es útil para desentrañar cómo el flujo de actina influye en la mecanotransducción, la señalización de adhesión y las respuestas al estrés en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DSTN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DSTN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DSTN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DSTN para la investigación de la señalización de ADF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DSTN críticos para la función de ADF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DSTN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ADF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ADF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DSTN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADF (h) y el plásmido HDR ADF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DSTN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DSTN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.